Inotuzumab ozogamicin（InO）是一种抗体-药物结合物，由重组人源化免疫球蛋白G型4亚型（IgG4）抗体组成，通过不耐酸的连接物共价结合到卡利霉素的半合成衍生物上。

　　它是为治疗复发或难治性非霍奇金淋巴瘤（NHL）和急性淋巴细胞白血病（ALL）而开发的。基于该产品的免疫原性风险相对较低，临床研究中采用了标准的免疫原性检测方法。本文描述了抗体测量的分析方面，并强调了恶性血液病患者临床研究中的免疫原性数据。

　　用酶联免疫吸附试验检测非霍奇金淋巴瘤（NHL）患者的抗药物抗体（ADA），用MSD桥联电化学发光试验检测急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的抗药物抗体（ADA）。所有ADA检测呈阳性的患者也使用基于细胞的检测进行中和抗体检测（仅限关键研究）。

　　测量InO免疫原性的综合方法包括对影响免疫原性风险的相关因素进行评估，并制定强有力的生物分析策略，以评估潜在临床意义的关键方面。产品韩国奇力片的质量分几种档次相关因素、患者相关因素和治疗相关因素可能会影响生物疗法的免疫原性风险状况，在InO ADC的开发周期中进行了深思熟虑的评估。InO由抗体重链和轻链中100%的人类恒定区和抗体重链和轻链中100%的人类可变结构域框架区组成。铰链区的点突变（S229P）旨在稳定重链的共价二聚化，已包含在其他单克隆抗体-卡利他霉素结合物的序列中，包括先前许可的产品gemtuzumab-ozogamicin（MYLOTARG?, 辉瑞）。因此，基于其与其他人类免疫球蛋白的高度序列同源性，与其他单克隆抗体疗法相比，InO抗体部分的序列预计不会增加免疫原性风险。InO的calicheamicin部分含有碳水化合物结构，可能与某些患者体内存在的IgM抗碳水化合物抗体发生反应。因此，一些患者可能已有与InO反应的抗体。生产批次的生物化学和生物物理特性表明，聚集物、降解形式和杂质等物种水平较低，被认为有助于给药蛋白质的免疫原性。由于静脉注射InO，给药时间有限，以及NHL研究中联合治疗的免疫抑制作用，对InO诱导免疫反应的可能性被认为很低。在整个临床研究过程中，还评估了抗InO抗体可能导致严重临床后果的可能性。由于InO是一种没有内源性对应物的单克隆ADC，任何预先存在的抗体或产生的抗体都可能影响InO的抗肿瘤作用；然而，唯一的潜在安全后果可能是抗体介导的超敏反应，这在使用生物制药产品治疗的患者中很少发生。

　　基于该产品的免疫原性风险相对较低，临床研究中采用了标准的免疫原性检测方法。在NHL和所有研究中，使用两个单独的桥接平台测量对InO的免疫原性反应。在早期NHL研究中，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）平台测量免疫原性反应，该平台当时被认为是检测抗InO或抗利妥昔单抗抗体的金标准。根据实验室的科学经验和最佳实践，开发并验证了独立的抗InO和抗利妥昔单抗ELISA方法。在最近的所有研究中，根据监管期望和当前行业白皮书，开发并验证了基于MSD的桥接电化学发光（ECL）分析（美国食品和药物管理局药物评估与研究中心，2009年；人用医药产品委员会，2007年）。类似的桥联分析平台已成功用于吃奇力片后的反应其他经批准的ADC（Carrasco Triguero等人，2013年）。还对抗体反应进行了表征，以确定与G544抗体或InO的calicheamicin部分结合的特异性。对InO的抗体反应的特征在于结构域特异性和中和活性（仅对所有关键研究进行中和试验）。

　　基于MSD电化学发光的结合抗体分析支持急性淋巴细胞白血病研究

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　　MSD平台?基于ECL的架桥试验用于检测和滴度血清中特异性结合InO的免疫球蛋白。在所有临床研究中，抗InO抗体的测定包括4个连续步骤：（1）筛选，（2）确认，（3）滴度测定，（4）抗体特异性表征（确定G544和卡利霉素BSA的特异性）。如图2所示，所有分析的基本分析程序均相同。

　　关键试剂

　　根据制造商的说明，Inotuzumab ozogamicin以20:1的比例与钌（II）三联吡啶，N-羟基琥珀酰亚胺酯（Sulfo Tag, MSD）或生物素以15:1的比例结合。以兔（Rb）抗G544和抗卡利霉素多克隆抗体作为阳性对照（PCs）。在筛选试验中，使用Rb抗G544血清在试验基质中分别以1:75和1:750稀释制备高和低PCs。在验证期间，亲和纯化抗体用于敏感性测试。在验证性试验中，使用2个PCs（Rb抗G544和Rb抗卡利沙明）。对于Cut off点测定，使用50份所有人类血清样本，并储存在70°C直到分析，收集正常人血清作为阴性对照（NC）。

　　免疫原性分析根据当前行业惯例和监管指南进行验证。在关键试验期间，164例ALL患者中有7例（4%）ADA呈阳性。在ADAs阳性的患者中未检测到中和抗体。在I/II期ALL研究中未检测到ADA。在非霍奇金淋巴瘤的研究中，630名患者中有27名（4%）出现了InO抗体。ADA阳性和ADA阴性患者的InO清除率相似。

　　标准免疫原性策略为评估InO疗效、药代动力学或患者其他临床参数的影响提供了数据。ADA对InO的发生率很低，没有临床意义。

　　本文摘自第三代免疫分析技术

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